噬菌体展示抗体合成文库的构建及禽流感检测最新研究成果

发布者:系统管理员发布时间:2015-01-13浏览次数:1904

2014年12月,国际知名杂志Journal of translational medicine(5-Year IF=4.1)连续在线发表了两项生命科学研究院“发育与疾病相关基因”教育部重点实验室万亚坤老师课题组题为《Construction of a synthetic phage-displayed Nanobody library with CDR3 regions randomized by trinucleotide cassettes for diagnostic applications》和《Streptavidin-biotin-based directional double Nanobody sandwich ELISA for clinical rapid and sensitive detection of influenza H5N1》的研究工作。 (http://www.translational-medicine.com/content/12/1/343) (http://www.translational-medicine.com/content/12/1/352)。

在《Construction of a synthetic phage-displayed Nanobody library with CDR3 regions randomized by trinucleotide cassettes for diagnostic applications》这项研究中,研究人员以纳米抗体保守框架cAbBCII10为VHH骨架结构,通过搭桥PCR组装,合成了一种CDR3区氨基酸序列随机排布同时不含半胱氨酸及终止密码子的VHH基因的噬菌体展示文库。利用人前白蛋白PA和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白NGAL为靶标蛋白,成功筛选得到相应的纳米抗体。抗体亲和力较高,特异性强,耐热性能良好。基于获得的纳米抗体,研究人员还构建了一套有效的PA检测方法。该文库能够解决某些抗原毒性大,致病性强,无免疫性或可溶性差等原因造成无法免疫骆驼从而不能构建文库以筛选相应纳米抗体的问题,可以作为免疫文库的强有力支持。万亚坤教授为通讯作者,硕士研究生严俊荣为第一作者。

在《Streptavidin-biotin-based directional double Nanobody sandwich ELISA for clinical rapid and sensitive detection of influenza H5N1》研究中,研究者首次构建了针对高致病性甲型H5N1禽流感病毒的纳米抗体文库,从中筛选获得了两株特异、稳定的纳米抗体,并建立纳米抗体生物素化系统,分析了基于链霉亲和素定向捕获生物素化的纳米抗体的检测系统。与常规双抗夹心法相比,他们建立的这种新的定向捕获法具有更加高的检测灵敏度和更加宽的检测范围。与现有市场化的检测产品和方法比较,该检测系统能够更加高效快速的检测出禽流感H5N1病毒。为研发新型禽流感病毒相关检测试剂盒奠定了坚实的基础。万亚坤教授为通讯作者,硕士研究生朱敏为第一作者。